PCR實驗室建設(shè)是一項非常復(fù)雜的系統(tǒng)工程，很多朋友都在網(wǎng)絡(luò)上試圖尋找一些詳細點的相關(guān)資料，可是非常難找到專業(yè)和詳細的文檔，今天我們就破例分享一下如此專業(yè)和詳細的PCR實驗室建設(shè)規(guī)劃方案給大家:
       PCR實驗室的核心問題是如何避免污染，本工程實例從ＰＣＲ實驗室環(huán)境安全角度闡述如何避免污染。ＰＣＲ實驗室需獨立區(qū)域設(shè)置，避免與外界環(huán)境的交叉污染，從工藝平面布局、凈化區(qū)域劃分、人物流走向和壓力壓差控制等方面綜合闡述實驗室環(huán)境安全控制措施。

　　PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）的簡稱，是一種分子生物學技術(shù)，用于放大特定的ＤＮＡ片段，可看作生物體外的特殊ＤＮＡ復(fù)制。PCR技術(shù)的問世成了生物學界的一個熱點，特別在分子生物學和人類遺傳學等研究領(lǐng)域。PCR作為一項“革命性的新技術(shù)”不僅推動分子生物學及相關(guān)學科的發(fā)展，而且為相應(yīng)的產(chǎn)業(yè)提供一片“天空”，在食品、醫(yī)學、以及其他方面的應(yīng)用都具有重要的作用。由于PCR技術(shù)的高度敏感性，ＰＣＲ技術(shù)要求髙、影響因素多，從樣品制備到結(jié)果的產(chǎn)生，任何一處細微的失誤均會造成結(jié)果的偏差，導(dǎo)致樣品的假陽性和假陰性結(jié)果。因此PCR實驗室的核心問題是如何避免污染，本文結(jié)合工程實例主要從ＰＣＲ實驗室環(huán)境安全角度闡述如何避免污染。

　　1.執(zhí)行標準

         以下的PCR實驗室相關(guān)標準都是我們在做實驗室建設(shè)的時候必須要遵從的執(zhí)行標準，而這些標準大家是可以免費在網(wǎng)絡(luò)上查詢到的，后續(xù)我們也會幫大家逐步收集整理起來，我們也有類似的一個相關(guān)標準的集合頁面:實驗室設(shè)計規(guī)范與標準

　　《實驗室生物安全通用要求》國家標準ＧＢ１９４８９－２００８

　　《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》衛(wèi)醫(yī)發(fā)［２００２］８號文

　　《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)［２００２］１０號文

　　《臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)置標準》衛(wèi)醫(yī)發(fā)［２００２］１０號文附件

　　《基因檢驗實驗室技術(shù)要求》國家質(zhì)監(jiān)檢驗總局ＳＮ／Ｔ１１９３－２００３

　　《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境－生物污染控制》國際標準ＩＳＯ１４６９８

　　《潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》國家標準ＧＢ５００７３－２０１３

　　《潔凈室施工及驗收規(guī)范》ＧＢ５０５９１－２０１０

　　《室內(nèi)空氣質(zhì)量標準》國家標準ＧＢ/T1８８３－２００２

　　《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》國家標準ＧＢ５０３４６－２０１１

　　《病原微生物實驗室生物安全管理條例》衛(wèi)生部（２００４－１１－12）

　　2.實驗室布局

　　在PCR實驗室研究過程中，很多操作都會產(chǎn)生氣溶膠，比如離心、混勻等操作。為保證環(huán)境安全，ＰＣＲ實驗室設(shè)計建造需獨立區(qū)域設(shè)置，避免與其余環(huán)境的交叉混雜，下面根據(jù)工程實例從平面布局、凈化區(qū)域劃分，人物流設(shè)置和壓力壓差控制等方面具體介紹。

　　2.1.平面功能劃分

　　根據(jù)PCR實驗室按工藝需求及相關(guān)規(guī)定劃分為６間，分別是１試劑準備區(qū)、２標本制備區(qū)、３擴增反應(yīng)一區(qū)、４純化區(qū)、5擴增反應(yīng)二區(qū)、６后純化區(qū)，布局見圖１。按國家衛(wèi)生部的要求，各實驗區(qū)域必須是相互獨立的，不能直通，每個獨立實驗區(qū)設(shè)有專門的閘間供工作人員換工作服和鞋，進入各工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向順序，即只能從左邊試劑準備區(qū)，標本制備區(qū)，擴增反應(yīng)一區(qū)，純化區(qū)，擴增反應(yīng)二區(qū)到后純化區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。平面布局滿足《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》衛(wèi)醫(yī)發(fā)［２００２］８號文、《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)［２００２］１０號文及附件《臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)置標準》等相關(guān)實驗室設(shè)置標準的要求。



　　2.2.凈化區(qū)域劃分

　　為避免樣本間的交叉污染，房間采取凈化控制，總體設(shè)置為１０萬級。閘間設(shè)置為正壓區(qū)，保證與外界環(huán)境隔離，避免從鄰近區(qū)域進入本區(qū)域的氣溶膠污染。詳見圖２。

　　2.3.人流物流設(shè)置

　　人流物流設(shè)置各行其道，避免交叉混雜，整個區(qū)域設(shè)置一個公用走廊，工作區(qū)域之間設(shè)置試劑物品傳遞專用窗，做到人物分流。

　　物流：在試劑準備區(qū)與標本制備區(qū)、標本制備區(qū)與ＰＣＲ擴增區(qū)之間，以及擴增區(qū)域和純化區(qū)之間設(shè)置有電子連鎖不銹鋼傳遞窗，以單向進行試劑、標本等物品傳送，制的試劑通過單向傳遞窗由試劑準備區(qū)傳遞到標本制備區(qū)，處理過的標本通過單向傳遞窗由標本制備區(qū)傳遞到ＰＣＲ擴增區(qū)，按照工藝流程逐次傳遞，避免返流。單向物品傳送系統(tǒng)既保障了標本試劑不受污染，又保障了標本試劑不污染環(huán)境。

　　人流：人員通過閘間分別進入各自實驗區(qū)域，進出各實驗區(qū)域需要在閘間區(qū)域更換潔凈工作服，手消毒等。詳見圖３。

　2.4.壓力壓差設(shè)置

　　PCR實驗室應(yīng)設(shè)置為負壓潔凈室，通過壓差控制，使整個ＰＣＲ實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。各個實驗室與非潔凈區(qū)之間的閘間保持正壓，＞１０Ｐａ，實驗與閘間之間的氣流組織方向為：試劑準備區(qū)空氣流向閘間，標本制備區(qū)流向閘間，而PCR擴增區(qū)氣流方向由閘間流向PCR擴增區(qū)，純化區(qū)同理；同時按照試劑單向流方向，各個實驗室之間設(shè)置不同壓力梯度來實現(xiàn)單向氣流組織方向，由試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應(yīng)一區(qū)、純化區(qū)、擴增反應(yīng)二區(qū)、到后純化區(qū)壓力逐漸降低，形成單向負壓壓力梯度依次為：＋２０Ｐａ、＋１５Ｐａ、－５Ｐａ、－１０Ｐａ、－２０Ｐａ、－２５Ｐａ。詳見圖４。