藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則用于指導藥品微生物檢驗實驗室的質(zhì) 量控制。涉及生物安全的操作，應符合相應國家、行業(yè)、地方的標準和規(guī)定等。

        藥品微生物的檢驗結(jié)果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗中，為保證檢驗結(jié)果的可靠性，必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并嚴格按照藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則要求進行檢驗。

        藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則包括以下幾個方面:人員、培養(yǎng)基、 試劑、菌種、設(shè)施和環(huán)境條件、設(shè)備、樣品、檢驗方法、污染廢棄物處理、結(jié)果有效性的保證、實驗記錄、結(jié)果的判斷和檢測報告、文件等。

人員

        微生物實驗室應設(shè)置質(zhì)量負責人、技術(shù)管理者、檢驗人員、生物安全責任 人、生物安全監(jiān)督員、菌種管理員及相關(guān)設(shè)備和材料管理員等崗位，可通過一 人多崗設(shè)置。

        從事藥品微生物試驗工作的人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。

        檢驗人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。微生物實 驗室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗水平應與他們的職責范圍相符，如:管理技能、 實驗室安全、試驗安排、預算、實驗研究、實驗結(jié)果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、 技術(shù)報告書寫等。

        實驗人員上崗前應依據(jù)所在崗位和職責接受相應的培訓，在確認他們可以承擔某一試驗前，他們不能獨立從事該項微生物試驗。培訓內(nèi)容包括勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)等方面的培訓，如無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種、傳代和保藏、潔凈區(qū)域的微生物監(jiān)測、微生物檢查方法和鑒定基本技術(shù)等，經(jīng)考核合格后方可上崗。 

        實驗人員應經(jīng)過實驗室生物安全方面的培訓，熟悉生物安全操作知識和消毒滅菌知識，保證自身安全，防止微生物在實驗室內(nèi)部污染。

        實驗室應確定實驗人員持續(xù)培訓的需求，制定繼續(xù) 教育計劃，保證知識與技能不斷的更新。

        實驗室應確定人員具備承擔相應實驗室活動的能力，以及評估偏離影響程 度的能力。可通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗證或?qū)嶒?室間比對等方式客觀評估檢驗人員的能力，并授權(quán)從事相應的實驗室活動， 必要時對其進行再培訓并重新評估。當使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術(shù)時， 有必要在檢測前確認微生物檢測人員的操作技能。

        所有人員的培訓、考核內(nèi)容和結(jié)果均應記錄歸檔。

培養(yǎng)基

        培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

        微生物實驗室使用的培養(yǎng)基可按培養(yǎng)基處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基配制，或直接采用商品化的預制培養(yǎng)基。

        商品化的脫水培養(yǎng)基或預制培養(yǎng)基應設(shè)立接收標準，并進行符合性驗 收:包括品名、批號、數(shù)量、生產(chǎn)單位、外觀性狀(瓶蓋密封度、內(nèi)容物有無 結(jié)塊霉變等)、處方和使用說明、有效期、貯藏條件、生產(chǎn)商提供的質(zhì)控報告 和/或其他相關(guān)材料(如配方變更)。

        培養(yǎng)基的配制

        制備培養(yǎng)基時，應選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分 進行配制。不應使用結(jié)塊、顏色發(fā)生變化或其他物理性狀明顯改變的脫水培養(yǎng)基。 

        脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光， 所有的容器應密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。

        為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠并符合要求，配制時，脫水培養(yǎng)基應按 使用說明上的要求操作，自制培養(yǎng)基應按配方準確配制。各脫水培養(yǎng)基或各配方組分稱量應達到相應的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的 溶劑是純化水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。

        配制培養(yǎng)基所用容器不得影響培養(yǎng)基質(zhì)量，一般為玻璃容器。培養(yǎng)基配制 所用的容器和配套器具應潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來 物質(zhì)的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應預先進行滅 菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

        配制時，培養(yǎng)基應完全溶解混勻，再行分裝與滅菌。若需要加熱助溶，應注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其 他組分時，加入后應充分混勻。

        滅菌

        培養(yǎng)基應采用經(jīng)驗證的滅菌程序滅菌。商品化的預制培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌等技術(shù)。

        培養(yǎng)基若采用不適當?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降 低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng) 基滅菌方法和條件，可通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外，對高 壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分 布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞 絕大多數(shù)的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方 式也將影響加熱的速度。

        應確定每批培養(yǎng)基滅菌后的 pH 值(冷卻至 25°C測定)。若培養(yǎng)基處方 中未列出 pH 值的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的 pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH 值的范圍不能超過規(guī)定值±0.2。如需滅菌后進行調(diào)整，應使用滅菌 或除菌的溶液。

        培養(yǎng)基的貯藏

        自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期、制備人等信息，并在已驗證 的條件下貯藏。商品化的預制培養(yǎng)基應根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要 求進行貯藏，所采用的貯藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機械保護。

        培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在高壓滅菌器中，瓊脂培養(yǎng)基不得在 0°C或 0°C以下 存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。培養(yǎng)基保存應防止水分流失，避光保存。 瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過 1 周，且應密閉包裝，若 延長保存期限，保存期需經(jīng)驗證確定。

        培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗

        實驗室應制定試驗用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制程序，確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢查的需要。

        實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方 法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。

        所有配制好的培養(yǎng)基均應進行質(zhì)量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī) 監(jiān)控項目是 pH 值、適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基 在有效期內(nèi)應依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

        除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制 備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行 1 次。 如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查 試驗。試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進行選擇，也可增加生產(chǎn) 環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。

        培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗若不符合規(guī)定，應尋找不合格的原因，以防止問題重復出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

        固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許 1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量 下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱，若采用其 它溶解方法，應對其進行評估，確認該溶解方法不影響培養(yǎng)基質(zhì)量。融化的培 養(yǎng)基應置于 45~50°C的環(huán)境中，不得超過 8 小時。使用過的培養(yǎng)基(包括失效 的培養(yǎng)基)應按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進行。

        制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂，裝量應相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。

        用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，以防止外來的 污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

        實驗室應有文件規(guī)定微生物實驗用培養(yǎng)基、原材料及補充添加物的采購、 驗收、貯藏、制備、滅菌、質(zhì)量檢查與使用的全過程， 并對培養(yǎng)基的驗收、制備、滅菌(包括滅菌后貯藏)、和貯藏、質(zhì)量控制試驗 和使用情況等進行記錄。包括培養(yǎng)基名稱，培養(yǎng)基表觀特性，配制日期和配制 人員的標識，培養(yǎng)基/溶液的類型、體積，分裝的體積和滅菌后的體積(作為 稀釋液或其他原因要對體積進行控制)，成分名稱、每個成分物質(zhì)的含量、制 造商、批號、稱量，pH值，滅菌措施包括方式、設(shè)備、時間和溫度等。

 試劑

        微生物實驗室應有試劑接收、檢查和貯藏的程序，以確保所用試劑質(zhì)量符合相關(guān)檢查要求。

        實驗用關(guān)鍵試劑，在使用和貯藏過程中，應對每批試劑的適用性進行驗證。實驗室應對試劑進行管理控制，保存和記錄相關(guān)資料。

        實驗室配制的所有試劑、試液及溶液應貼好標簽，標明名稱、制備 依據(jù)、適用性、濃度、貯藏條件、制備日期、有效期及制備人等信息。

菌種

        試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結(jié)果一致性的重要保證。

        藥品微生物檢驗用的試驗菌應為有明確來源來的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

        標準菌株應來自認可的國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)，的其復蘇、復壯或培養(yǎng) 物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內(nèi)或國外菌種保藏機構(gòu)獲得的標準菌株經(jīng)過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應進行純度和特性確認。標準儲備菌株保存時， 可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷 凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍(低于-30°C)等方法保存。低于-70°C或低溫 冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標準儲備菌株可用于制備每月或每 周 1 次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

        工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制，不得超過 5 代(從菌種保藏機構(gòu)獲得的標準菌株為第 0 代)，以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認為是傳代 1 次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。

        工作菌株不可替代標準菌株，標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。標準菌株如果經(jīng)過確認試驗證明已經(jīng)老化、退化、變異、污染等或該菌株已無使用需要時，應及時滅菌銷毀。

        菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關(guān)鍵指標的確認，實驗室應建立菌種管理(從標準菌株到工作菌株)的文件和記錄，內(nèi)容包括菌株的申購、進 出、收集、貯藏、確認、轉(zhuǎn)種、使用以及銷毀等全過程。每支菌種都應注明其 名稱、標準號、接種日期、傳代數(shù)，并記錄菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、 菌種保藏的位置和條件等信息。

設(shè)施和環(huán)境條件 

        微生物實驗室應具有進行微生物檢測所需的適宜、充分的設(shè)施條件，實驗環(huán)境應保證不影響檢驗結(jié)果的準確性。微生物實驗室應專用，并與生產(chǎn)、辦公等其他區(qū)域分開。

        實驗室的布局和運行 

        微生物實驗室的布局與設(shè)計應充分考慮到試驗設(shè)備安裝、良好微生物實驗室操作規(guī)范和實驗室安全的要求。以能獲得可靠的檢測結(jié)果為重要依據(jù)，且符 合所開展微生物檢測活動生物安全等級的需要。實驗室布局設(shè)計的基本原則是 既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對人員和環(huán)境造成危害， 同時還應考慮活動區(qū)域的合理規(guī)劃及區(qū)分，避免混亂和污染，提高微生物實驗室操作的可靠性。

        微生物實驗室的設(shè)計和建筑材料應考慮其適用性，以利清潔、消毒、滅菌 并減少污染的風險。潔凈區(qū)域應配備獨立的空氣機組或空氣凈化系統(tǒng)， 以滿足相應的檢驗要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應符 合工作要求。空氣過濾系統(tǒng)應定期維護和更換, 并保存相關(guān)記錄。微生物實驗室應包括相應的潔凈區(qū)域和生物安全控制區(qū)域，同時應根據(jù)實 驗目的，在時間或空間上有效分隔不相容的實驗活動，將交叉污染的風險降到最低。生物安全控制區(qū)域應配備滿足要求的生物安全柜，以避免有危害性的生物因子對實驗人員和實驗環(huán)境造成危害。霉菌試驗要有適當?shù)拇胧?/span>防止孢子污染環(huán)境。對人或環(huán)境有危害的樣品應采取相應的隔離防護措施。一般情況下，藥品微生物檢驗的實驗室應有符合無菌檢查法(通則1101)和微生 物限度檢查(通則1105、通則1106)要求的、用于開展無菌檢查和微生物限 度檢查    及無菌采樣等檢測活動的、獨立設(shè)置的潔凈室(區(qū))或隔離系統(tǒng)，并配備相應的陽性菌實驗室、培養(yǎng)室、試驗結(jié)果觀察區(qū)、培養(yǎng)基及實驗用具準備(包括滅菌)區(qū)、樣品接收和貯藏室(區(qū))、標準菌株貯藏室(區(qū))、污染物處理區(qū)和文檔處理區(qū)等。微生物基因擴增檢測實驗室原則上應設(shè)分隔開 的工作區(qū)域以防止污染，包括(但不限于)試劑配制與貯存區(qū)、核酸提取區(qū)、 核酸擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。應對上述區(qū)域明確標識。

        微生物實驗的各項工作應在專屬的區(qū)域進行，以降低交叉污染、假陽性結(jié) 果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風險。無菌檢查應在 B 級背景下的 A 級單向流潔凈區(qū)域 或隔離器系統(tǒng)中進行，微生物限度檢查應在不低于 D 級背景下的 B 級單向流空 氣區(qū)域內(nèi)進行。 A 級和 B 級區(qū)域的空氣供給應通過終端高效空氣過濾器 (HEPA)。

        一些樣品若需要證明微生物的生長或進一步分析培養(yǎng)物的特性，應在生物安全控制區(qū)域進行。任何出現(xiàn)微生物生長的培養(yǎng)物不得在實驗室潔凈區(qū)域內(nèi)打開。對染菌的樣品及培養(yǎng)物應有效隔離，以減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。病原微生物的分離鑒定工作應在相應級別的生物安全實驗室進行。

         實驗室應制定進出潔凈區(qū)域的人和物的控制程序和標準操作規(guī)程，對可能影響檢驗結(jié)果的工作(如潔凈度驗證及監(jiān)測、消毒、清潔維護等)或涉及生物安全 的設(shè)施和環(huán)境條件的技術(shù)要求能夠有效地控制、監(jiān)測并記錄，當條件滿足檢測 方法要求方可進行樣品檢測工作。微生物實驗室使用權(quán)限應限于經(jīng)授權(quán)的工作人 員，實驗人員應了解潔凈區(qū)域的正確進出的程序，包括更衣流程;該潔凈區(qū)域的 預期用途、使用時的限制及限制原因;適當?shù)臐崈艏墑e。

        環(huán)境監(jiān)測 

        微生物實驗室應按相關(guān)國家標準制定完整的潔凈室(區(qū))和隔離系統(tǒng)的驗證和環(huán)境監(jiān)測標準操作規(guī)程，環(huán)境監(jiān)測項目和監(jiān)測頻率及對超標結(jié)果的處理應有書面程序。監(jiān)測項目應涵蓋到位，包括對空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)(溫度、相對濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等)的有效控制和監(jiān)測。環(huán)境監(jiān)測按藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導原則(通則 9205)進行。

        清潔、消毒和衛(wèi)生 微生物實驗室應有制定清潔、消毒和衛(wèi)生的標準操作規(guī)程，規(guī)程中應涉及環(huán)境監(jiān)測結(jié)果。 

        實驗室在使用前和使用后應進行消毒，并定期監(jiān)測消毒效果，要有足夠洗手和手消毒設(shè)施。應有對有害微生物發(fā)生污染的處理規(guī)程。 所用的消毒劑種類應滿足潔凈實驗室相關(guān)要求并定期更換。理想的消毒劑既能 殺死廣泛的微生物、對人體無毒害、不會腐蝕或污染設(shè)備，又應有清潔劑的作 用、性能穩(wěn)定、作用快、殘留少、價格合理。所用消毒劑和清潔劑的微生物污 染狀況應進行監(jiān)測，并在規(guī)定的有效期內(nèi)使用，A 級和 B 級潔凈區(qū)應當使用無 菌的或經(jīng)無菌處理的消毒劑和清潔劑。

設(shè)備

        微生物實驗室應配備與檢驗能力和工作量相適應的儀器設(shè)備，其類型、測量范圍和準確度等級應滿足檢驗所采用標準的要求。設(shè)備的安裝和布局應便于操作，易于維護、清潔和校準，并保持清潔和良好的工作狀態(tài)。用于試驗的每臺儀器、設(shè)備應該有唯一標識。

        儀器設(shè)備應有合格證書，實驗室在儀器設(shè)備完成相應的檢定、校準、驗證、 確認其性能，并形成相應的操作、維護和保養(yǎng)的標準操作規(guī)程后方可正式使用， 儀器設(shè)備使用和日常監(jiān)控要有記錄。

        設(shè)備的維護 

        為保證儀器設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應定期對其進行維護和性能驗證，并保存相關(guān)記錄。儀器設(shè)備若脫離實驗室或被檢修，恢復使用前應重新確認其性能符合要求。

        重要的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、冰箱等，應由專人負責進行維護和保管，保證其運行狀態(tài)正常和受控，同時應有相應的備用設(shè)備以保證試驗菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性，高壓滅菌器、隔離器、生物安全柜等設(shè)備實驗人員應經(jīng)培訓后持證上崗。對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋等影響實驗準確性的關(guān)鍵設(shè)備應在其運行過程中對關(guān)鍵參數(shù)(如溫度、壓力)進行連續(xù)觀測和記錄， 有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置。如果發(fā)生偏差，應評估對以前的檢測 結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。

        對于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應定期進行清潔和消毒。

        對試驗需用的無菌器具應實施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應的標準操作規(guī)程，無菌器具應有明確標識并與非無菌器具加以區(qū)別。

        實驗室的某些設(shè)備(例如培養(yǎng)箱、高壓滅菌器和玻璃器皿等) 應專用，除 非有特定預防措施，以防止交叉污染。

        校準、性能驗證和使用監(jiān)測 

        微生物實驗室所用的儀器應根據(jù)日常使用的情況進行定期的校準，并記錄。校準的周期和校驗的內(nèi)容根據(jù)儀器的類型和設(shè)備在實驗室產(chǎn)生的數(shù)據(jù)的重要性 不同而不同。儀器上應有標簽說明校準日期和再校準日期。

        (1)溫度測量裝置

        溫度不但對實驗結(jié)果有直接的影響，而且還對儀器設(shè)備的正常運轉(zhuǎn)和正確 操作起關(guān)鍵作用。相關(guān)的溫度測量裝置如培養(yǎng)箱和高壓滅菌器中的溫度計、 熱電耦和鉑電阻溫度計，應具有可靠的質(zhì)量并進行校準，以確保所需的精確度， 溫度設(shè)備的校準應遵循國家或國際標準。

        溫度測量裝置可以用來監(jiān)控冰箱、超低溫冰箱、培養(yǎng)箱、水浴鍋等設(shè)備的溫度，應在使用前驗證此類裝置的性能。

        (2)滅菌設(shè)備

        滅菌設(shè)備的滅菌效果應滿足使用要求。應使用多種傳感器(如:溫度、壓 力等)監(jiān)控滅菌過程。對實際應用的循環(huán)條件和裝載狀態(tài)需定期進 行性能驗證，經(jīng)過維修或工藝變化等可能對滅菌效果產(chǎn)生影響時，應重新驗證。 應定期使用生物指示劑檢查滅菌設(shè)備的效果并記錄，指示劑應放在不易達到滅 菌的部位。日常監(jiān)控可以采用物理或化學方式進行。 非簡單壓力容器操作人員需持有特種作業(yè)人員證書。

        (3)生物安全柜、層流超凈工作臺、高效過濾器

        應由有專業(yè)技能的人員進行生物安全柜、層流超凈工作臺及高效過濾器的安裝與更換，要按照確認的方法進行現(xiàn)場生物和物理的檢測，并定期進行再驗證。

        實驗室生物安全柜和層流超凈工作臺的通風應符合微生物風險級別及符合安全要求。應定期對生物安全柜、層流超凈工作臺進行監(jiān)測，以確保其性能符合相關(guān)要求。實驗室應保存檢查記錄和性能測試結(jié)果。

        (4)其他設(shè)備

        懸浮粒子計數(shù)器、浮游菌采樣器應定期進行校準; pH 計、天平和其它類似儀器的性能應定期或在每次使用前確認;若濕度對實驗結(jié)果有影 響，濕度計應按國家或國際標準進行校準;當所測定的時間對檢測結(jié)果有影響 時，應使用校準過的計時儀或定時器;使用離心機時，應評估離心機每分鐘的 轉(zhuǎn)數(shù)，若離心是關(guān)鍵因素，離心機應該進行校準。

樣品

        樣品采集

        試驗樣品的采集，應遵循隨機抽樣的原則，由經(jīng)過培訓的人員在受控條件下進行。如需無菌抽樣，應采用無菌操作技術(shù)，并在具有無菌條件的特定區(qū)域中進行，防止 樣品受到微生物污染而導致假陽性的結(jié)果。抽樣的任何消毒過程(如抽樣點的 消毒)不能影響樣品中微生物的檢出。抽樣環(huán)境應監(jiān)測并記錄，同時還需記錄采樣時間。

        抽樣容器應貼有唯一性的所抽樣品應有清晰標識，避免樣品混淆和誤用。 標識應包括注明樣品名稱、批號、抽樣日期、采樣容器、抽樣人等信息，使標 識安全可見并可追溯。抽樣應由經(jīng)過培訓的人員使用無菌設(shè)備在無菌條件下進 行無菌操作。抽樣環(huán)境應監(jiān)測并記錄，同時還需記錄采樣時間。

        樣品儲存和運輸

        待檢樣品應在合適的條件下貯藏并保證其完整性，盡量減少污染的微生物發(fā)生變化。樣品在運輸過程中，應保持原有(規(guī)定)的儲存條件或采取必要的 措施(如冷藏或冷凍)。應明確規(guī)定和記錄樣品的貯藏和運輸條件。

        樣品的確認和處理

        實驗室應有被檢樣品的傳遞、接收、儲存和識別管理程序。 

        實驗室在收到樣品后應根據(jù)有關(guān)規(guī)定盡快對樣品進行檢查，并記錄被檢樣品所有相關(guān)信息，如:接收日期及時間、接收時樣品的狀況、采樣操作的特征 (包括采樣日期和采樣條件等)、貯藏條件。

        如果樣品存在數(shù)量不足、包裝破損、標簽缺失、溫度不適等，實驗室應在決定是否檢測或拒絕接受樣品之前與相關(guān)人員溝通。樣品的包裝和標簽有可能被嚴重污染，因此搬運和儲存樣品時應小心以避免污染的擴散，容器外部的消毒應不影響樣品的完整性。樣品的任何異常狀況在檢驗報告中應有說明。

        選擇具有代表性的樣品，根據(jù)有關(guān)的國家或國際標準，或者使用經(jīng)驗證的實驗方法，盡快進行檢驗。

        實驗室應按照書面管理程序?qū)悠愤M行保留和處置。已知被 污染的樣品應經(jīng)過無害化處理。

檢驗方法

        檢驗方法選擇

        藥品微生物檢驗時，應根據(jù)檢驗目的選擇適宜的方法進行樣品檢驗。

        檢驗方法的適用性確認

        藥典方法或其他相關(guān)標準中規(guī)定的方法是經(jīng)過驗證的，在引入檢測之前，實驗室應證實能夠正確地運用這些方法。樣品檢驗時所采用的方法應經(jīng)適用性 確認。當發(fā)布機構(gòu)修訂了標準方法，應在所需的程度上重新進行方法適用性確認。

        實驗室對所用商業(yè)檢測系統(tǒng)如試劑盒等應保留確認數(shù)據(jù)，這些確認數(shù)據(jù)可由制造者提供或由第三方機構(gòu)評估，必要時，實驗室應對商業(yè)檢測系統(tǒng)進行確認。

        檢驗方法的驗證

       如果檢驗方法不是標準中規(guī)定的方法，使用前應進行替代方法的驗 證，確認其應用效果優(yōu)于或等同于標準方法。替代方法的驗證按藥品微生物 檢驗替代方法驗證指導原則(通則9201)進行。

污染廢棄物處理

        實驗室應有妥善處理廢棄樣品、過期(或失效)培養(yǎng)基和有害廢棄物的設(shè)施和制度，旨在減少檢查環(huán)境和材料的污染。污染廢棄物管理應符合國家和地方法規(guī)的要求，并應交由當?shù)丨h(huán)保部門 資質(zhì)認定的單位進行最終處置，由專人負責并書面記錄和存檔。

        藥品微 生物實驗室應當制定針對所操作微生物危害的安全應急預案，規(guī)范生物安全事 故發(fā)生時的操作流程和方法，避免和減少緊急事件對人員、設(shè)備和工作的傷害 和影響。如:活的培養(yǎng)物灑出必須就地處理，不得使培養(yǎng)物污染擴散。實驗室 還應配備消毒劑、化學和生物學的溢出處理盒等相關(guān)裝備。

        檢測結(jié)果有效性的保證 

        內(nèi)部質(zhì)量控制

        為評估實驗室檢測結(jié)果的持續(xù)有效，實驗室應制訂質(zhì) 量控制程序和計劃，對內(nèi)部質(zhì)量控制活動的實施內(nèi)容、方式、責任人及結(jié)果評 價依據(jù)作出明確的規(guī)定。質(zhì)量控制計劃應盡可能覆蓋實驗室的所有檢測人員和 檢測項目。

        對于藥品微生物檢測項目，實驗室可定期使用標準樣品(如需氧菌總數(shù)標準樣品等)、質(zhì)控樣品或用標準菌株人工污染的樣品等開展內(nèi)部質(zhì)量控制，并根據(jù)工作量、人員水平、能力驗證結(jié)果、外部評審等情況明確規(guī)定質(zhì)控頻次。

        在實施人員比對、設(shè)備比對和方法比對時，要選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進行。

        外部質(zhì)量評估 

        實驗室應參加與檢測范圍相關(guān)的國家能力驗證或?qū)嶒炇抑g的比對實驗來評估檢測能力水平，通過參加外部質(zhì)量評估來評定檢測結(jié)果的偏差。

        實驗室應對評估結(jié)果進行分析，適時改進。

實驗記錄

        實驗結(jié)果的可靠性依賴于試驗嚴格按照標準操作規(guī)程進行，而標準操作規(guī)程應指出如何進行正確的試驗操作。為保證數(shù)據(jù)完整性，實驗記錄應包含所有關(guān)鍵的實驗細節(jié)，確?？芍貜驮搶嶒炇一顒?。

        實驗原始記錄至少應包括以下內(nèi)容:實驗日期、檢品名稱、實驗人員姓名、標準操作規(guī)程編號或方法、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果、實驗結(jié)果、偏差(存在時)、實驗參數(shù)(所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基和批號以及培養(yǎng)溫度等)、主管/復核人簽名。

        實驗記錄上還應顯示出檢驗標準的選擇, 如果使用的是藥典標準，必須保證 是現(xiàn)行有效的標準。

        試驗所用的每一個關(guān)鍵的實驗設(shè)備均應有記錄，設(shè)備日志或表格應設(shè)計合理，以滿足試驗記錄的追蹤性，設(shè)備溫度(水浴、培養(yǎng)箱、滅菌器)必須記錄， 且具有追溯性。

        實驗記錄可以是紙質(zhì)的，也可以是電子的。實驗記錄的修改應可追溯到前一個版本，并能保存原始及修改后的數(shù)據(jù)和文檔，包括修改日期、修改內(nèi)容和修改人員。

        歸檔的數(shù)據(jù)應確保安全。電子數(shù)據(jù)應定期備份，其備份及恢復流程必須經(jīng) 過驗證。紙質(zhì)數(shù)據(jù)應便于查閱。數(shù)據(jù)的保存期限應滿足相應規(guī)范要求，并建立 數(shù)據(jù)銷毀規(guī)程，數(shù)據(jù)的銷毀應經(jīng)過審批。

結(jié)果的判斷和檢測報告

        由于微生物試驗的特殊性，在實驗結(jié)果分析時，對結(jié)果應進行充分和全面 的評價，所有影響結(jié)果觀察的微生物條件和因素應完全考慮，包括與規(guī)定的限 度或標準有很大偏差的結(jié)果;微生物在原料、輔料或試驗環(huán)境中存活的可能性; 及微生物的生長特性等。特別要了解實驗結(jié)果與標準的差別是否有統(tǒng)計學意義。 若發(fā)現(xiàn)實驗結(jié)果不符合藥典各品種項下要求或另外建立的質(zhì)量標準，應進行原 因調(diào)查。引起微生物污染結(jié)果不符合標準的原因主要有兩個:試驗操作錯誤或 產(chǎn)生無效結(jié)果的試驗條件;產(chǎn)品本身的微生物污染總數(shù)超過規(guī)定的限度或檢出控制菌。

        異常結(jié)果出現(xiàn)時，應進行調(diào)查。調(diào)查時應考慮實驗室環(huán)境、抽樣區(qū)的防護條件、樣品在該檢驗條件下以往檢驗的情況、樣品本身具有使微生物存活或繁殖的特性等情況。此外，回顧試驗過程，也可評價該實驗結(jié)果的可靠性及實驗過程是否恰當。如果試驗操作被確認是引起實驗結(jié)果不符合的原因，那么應制定糾正和預防措施，按照正確的操作方案進行實驗，在這種情況下，對試驗過程及試驗操作應特別認真地進行監(jiān)控。 

        樣品檢驗應有重試的程序，如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗有錯誤而判實驗結(jié)果無效，應進行重試。如果需要，可按相關(guān)規(guī)定重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規(guī)定結(jié)果的分析 調(diào)查。上述情況應保留相關(guān)記錄。

        微生物實驗室檢測報告應該符合檢測方法的要求。實驗室應準確、清晰、明確和客觀地報告每一項或每一份檢測的結(jié)果。

        檢測報告的信息應該完整、可靠。

        檢驗過程出現(xiàn)與微生物相關(guān)的不合規(guī)范的數(shù)據(jù)，均屬于微生物數(shù)據(jù)偏差 (Microbiological Data Deviation, MDD)。對實驗室偏差數(shù)據(jù)的調(diào)查，有利 于持續(xù)提高實驗室數(shù)據(jù)的可靠性。

文件

        文件應當充分表明試驗是在實驗室里按可控的程序進行的，一般包 括以下方面:人員培訓與資格確認;設(shè)備驗收、驗證、檢定(或校準期間核查) 和維修;設(shè)備使用中的運行狀態(tài)(設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù));培養(yǎng)基制備、貯藏和質(zhì)量 控制;菌種管理;檢驗規(guī)程中的關(guān)鍵步驟;數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計算的確認;質(zhì)量 責任人對試驗報告的評估;數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查。

        所有程序和支持文件，應保持現(xiàn)行有效并易于人員取閱。涉及生物安全的操 作現(xiàn)場應防止文件被污染。